تعتمد مجموعة ELISA على المرحلة الصلبة من المستضد أو الجسم المضاد ووسم الإنزيم للمستضد أو الجسم المضاد. لا يزال المستضد أو الجسم المضاد المرتبط بسطح المادة الحاملة الصلبة يحتفظ بنشاطه المناعي ، ويحتفظ المستضد أو الجسم المضاد المسمى بالإنزيم بنشاطه المناعي ونشاط الإنزيم. في وقت التحديد ، تتفاعل العينة قيد الاختبار (التي يتم فيها قياس الجسم المضاد أو مولد الضد) مع مولد الضد أو الجسم المضاد الموجود على سطح المادة الحاملة الصلبة. يتم فصل معقد الجسم المضاد-المستضد المتكون على المادة الحاملة الصلبة عن المواد الأخرى في السائل عن طريق الغسل.
تتم إضافة المستضدات أو الأجسام المضادة التي تحمل علامة الإنزيم ، والتي ترتبط أيضًا بالمادة الحاملة الصلبة عن طريق التفاعل. في هذا الوقت ، تتناسب كمية الإنزيم في المرحلة الصلبة مع كمية المادة في العينة. بعد إضافة ركيزة تفاعل الإنزيم ، يتم تحفيز الركيزة بواسطة الإنزيم لتصبح منتجات ملونة. ترتبط كمية المنتج ارتباطًا مباشرًا بكمية المادة المختبرة في العينة ، لذلك يمكن إجراء التحليل النوعي أو الكمي وفقًا لعمق اللون.
تعمل الكفاءة التحفيزية العالية للإنزيمات على تضخيم نتائج الاستجابة المناعية بشكل غير مباشر ، مما يجعل الفحص حساسًا للغاية. يمكن استخدام ELISA لتحديد المستضدات ، ولكن يمكن أيضًا استخدامها لتحديد الأجسام المضادة.
المبادئ الأساسية لمجموعة ELISA
يستخدم تفاعلًا محددًا من المستضد والجسم المضاد لربط الكائن بالإنزيم ، ثم ينتج تفاعلًا لونيًا بين الإنزيم والركيزة من أجل التحديد الكمي. يمكن أن يكون موضوع القياس عبارة عن جسم مضاد أو مستضد.
هناك ثلاثة كواشف ضرورية في طريقة التحديد هذه:
مستضد المرحلة الصلبة أو الجسم المضاد (الممتزات المناعية)
مستضد أو جسم مضاد مرمز بالإنزيم (علامة)
الركيزة لعمل الإنزيم (عامل تطوير اللون)
في القياس ، يكون المستضد (الجسم المضاد) مرتبطًا أولاً بالناقل الصلب ، لكنه لا يزال يحتفظ بنشاطه المناعي ، ثم يُضاف اقتران (علامة) من الجسم المضاد (المستضد) والإنزيم ، والذي لا يزال يحتفظ بنشاطه المناعي الأصلي والإنزيم نشاط. عندما يتفاعل الاتحاد مع المستضد (الجسم المضاد) على المادة الحاملة الصلبة ، تتم إضافة الركيزة المقابلة للإنزيم. أي ، التحلل المائي التحفيزي أو تفاعل ولون REDOX.
يتناسب ظل اللون الذي ينتجه مع كمية المستضد (الجسم المضاد) المراد قياسه. يمكن ملاحظة هذا المنتج الملون بالعين المجردة ، والمجهر البصري ، والمجهر الإلكتروني ، ويمكن أيضًا قياسه بواسطة مقياس الطيف الضوئي (أداة تسمية الإنزيم). الطريقة بسيطة ومريحة وسريعة ومحددة.